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      Cisbio-HTRF筛选技术——高通量药物筛选必备神器

      来源:作者:人气:-发表时间:2019-06-25 12:55:00【
      Cisbio成立于1974年,总部位于法国Codolet,专为生命科学和诊断市场开发、生产和销售高质量试剂和试剂盒。与市场上现有的传统分析方法相比,Cisbio所开发的方法能够为使用者提供更灵敏的定量免疫分析。其中包括各种经过验证的药物发现筛选试剂和高通量分析试剂盒,以及仅用于体外诊断试剂盒。
      具体而言,Cisbio领先的HTRF® 筛选技术均相时间分辨荧光技术)是目前最为快捷方便的检测方法。西宝生物课提供Cisbio HTRF®相关检测试剂盒,货期稳定!产品线齐全!咨询订购热线:400-021-8158!
      HTRF 原理
      HTRF技术基于时间分辨荧光(TRF)和荧光共振能量转移(FRET)两大技术原理
      时间分辨荧光(TRF)
      TRF利用稀土元素中镧系元素的独特性质,与普通荧光的主要区别是荧光的持续时间不同。普通荧光的半衰期为纳秒级,镧系元素的半衰期是毫秒级,有6个数量级的差别。所以,在检测时,TRF有一个时间延迟---50微秒。经过这个时间延迟,普通荧光的信号几乎为零。所以,TRF的背景非常低,反映样品的实际情况。
      荧光共振能量转移(FRET)
      FRET技术利用了两种荧光基团的能量转移,这两种荧光基团分别称为能量供体(Donor)和能量受体(Acceptor)。Donor 被外来光源激发(例如氙灯或激光),如果它与Acceptor 比较接近,可以将能量共振转移到Acceptor上,使其受到激发,发出特定波长的发射光。将 Donor 和 Acceptor分别与相互作用的两个生物分子结合,生物分子的结合可以将 Donor 和 Acceptor 拉到足够近的距离,产生能量转移。由于Acceptor的发射光来自于能量转移,所以在实验中不需要将未结合与已结合的分子分开,即不需要洗涤步骤。
      HTRF 的优势:
      HTRF 是不需要洗涤的ELISA。其优势如下:
      · 操作非常简单:空板直接加样,加完即可检测,时间短(加样和孵育2h)
      · 体系非常稳定:天内可随时检测,信号基本不变
      · 适合珍贵样本:整个实验体系只需20ul
      · 均相检测体系:无需包被,免洗ELISA,省时省力
      · 数据客观真实:比值处理可有效去除背景荧光,假阳性率和价阴性率低
      · 反映样品的实际情况,假阳性假阴性率低,可去除由于天热产物自发荧光引起的背景
      HTRF 的能量供体
      HTRF的能量供体是铕(Eu)和铽(Tb)的穴状化合物。
      在这个穴状化合物里,Eu和Tb被永久地嵌合在一个笼子里,结构非常稳定。
      这个结构是由J. M. Lehn's教授发明的,并由此在1987年获得了诺贝尔奖。

      穴位化合物结构图
      HTRF 的能量受体
      HTRF的能量受体也有两种,XL665和d2。它们的光学性质相同,分子量不同。前者分子量为105 KD,实际上就是别藻蓝蛋白(APC)。我们将APC的亚基偶联在一起,使其不能解离,提高了稳定性。后者分子量为1KD,在某些实验中有独特的优势。
      HTRF 的操作步骤:
      HTRF的操作步骤非常简单,只需要将实验所需试剂加进去,然后孵育、检测即可,如下图所示。
      HTRF 检测仪器多样化:
      Cisbio与几乎所有的仪器供应商都建立了合作伙伴关系,下面是经过验证的仪器列表。所有这些仪器都标有HTRF®的标志。
      HTRF 的应用领域:
      应用产品列表:
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      试剂盒

      应用

      激酶(Kinase)

      STK

      1、丝氨酸、苏氨酸激酶活性检测
      2、抑制剂或激动剂的筛选

      TK

      1、酪氨酸激酶活性检测
      2、抑制剂或激动剂的筛选

      ADP Transcreener

      激酶、ATP酶活性检测,以及反应中生成ADP的定量

      G蛋白偶联受体
      (GPCR)

      cAMP

      1、Gs,Gi类受体激动剂和拮抗剂的筛选
      2、PDE酶活性的检测
      3、腺苷酸环化酶活性检测
      4、受体活性检测

      IP-One

      1、Gq类受体活性检测
      2、受体激动剂和拮抗剂,别构调节剂以及反向激动剂筛选
      3、缓慢激动剂的检测

      IP-One Elisa

      针对科研用户推出的传统的Elisa方法
      1、PLC相关受体的活性检测
      2、验证GPCR功能

      Tag-lite

      1、替代同位素做受体配体结合试验2、受体的二聚化试验
      2、受体的二聚化实验

      磷酸化蛋白

      pERK

      1、AKT/MAPK通路研究
      2、细胞表面受体研究

      pAKT

      1、AKT/MAPK通路研究
      2、细胞表面受体研究

      生物标记物
      (Kinase)

      Amyloid beta1-40

      1、Amyloid beta1-40 peptide定量
      2、分泌酶活性检测

      Apo A1

      1、载脂蛋白A1定量
      2、核受体活性检测

      Apo B

      1、载脂蛋白B定量
      2、核受体活性检测

      cGMP

      1、cGMP定量
      2、PDE酶活性检测
      3、鸟苷酸环化酶活性检测
      4、受体活性检测

      Cortisol

      1、Cortisol定量
      2、11β-HSD1活性检测

      Estradiol

      l、Estradiol定量
      2、17β-HSD1活性检测

      Histamine

      Histamine定量

      Insulin

      Insulin定量

      PEG2

      PGE2定量

      Sirt1

      Sirt1酶活性检测

      抗体定量

      Total IgG

      1、IgG定量
      2、带Fc标签蛋白定量
      3、人源化抗体筛选
      4、抗体生产时的质控

      Kappa Mab

      1、含Kappa轻链抗体的定量
      2、抗体生产时的质控

      Lamda Mab

      1、含Lamda轻链抗体的定量
      2、抗体生产时的质控

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